兩只克隆猴目前生長狀況良好；第三只克隆猴最早月底誕生

新京報訊 昨天，世界頂尖生物學(xué)術(shù)刊物《細胞》(Cell)以封面文章的形式在線發(fā)表中國科學(xué)家成功克隆靈長類動物獼猴的成果。中科院神經(jīng)科學(xué)研究所團隊突破了體細胞克隆猴的世界難題。

去年11月27日，世界上首個體細胞克隆猴“中中”在中科院神經(jīng)科學(xué)研究所、腦科學(xué)與智能技術(shù)卓越創(chuàng)新中心的非人靈長類平臺誕生， 12月5日第二個克隆猴“華華”誕生。

據(jù)介紹，“姐妹”倆的基因，來自同一個流產(chǎn)的雌性獼猴胎兒?？蒲腥藛T提取了這個獼猴胎兒的部分體細胞，將其細胞核“植入”若干個“摘除”了細胞核的卵細胞，結(jié)果產(chǎn)生了基因完全相同的后代，這個過程也就是克隆。

中國科學(xué)院神經(jīng)科學(xué)研究所非人靈長類研究平臺主任孫強介紹，他們當時移植了79個胚胎，有六個代孕母猴懷孕，最終健康產(chǎn)下了兩個猴寶寶。

孫強說，中中、華華兩個克隆猴有專業(yè)的獸醫(yī)團隊和精心的呵護，目前生長情況良好，沒有任何異常。通過27個微衛(wèi)星DNA位點分析證明克隆猴“中中”和“華華”的核基因組信息與供體體細胞完全一致。按他的說法是，長得越來越像。

記者從神經(jīng)所了解到，體細胞克隆猴還有第三只，目前尚在代孕母猴的孕育中。如果一切順利，將在本月底或下月初誕生。

- 焦點

1 克隆猴有幾道坎要過？

孫強介紹，克隆猴之所以這么多年沒有成功主要有三個難點。

一是細胞核不易識別，“去核”難度大。作為受體的卵細胞，必須先把細胞核“摘除”，才能容納體細胞的細胞核，重新構(gòu)建細胞。但是，猴的卵細胞核去核難度非常大。比較小鼠卵母細胞和食蟹猴(獼猴一種)卵母細胞，可以看出，小鼠卵母細胞的細胞核占比非常大，很容易去除；而食蟹猴卵母細胞的細胞核則占比非常小，非常難操作。

二是卵細胞容易提前激活。卵細胞處于休眠狀態(tài)，要繼續(xù)發(fā)育都需要激活，然后才能發(fā)育。自然受精的情況下，卵細胞在受精的同時就會被激活。而體細胞克隆，需要外界的刺激才能激活。因此，“喚醒”的時機要求非常精準。但是，使用傳統(tǒng)方式，猴的卵細胞很容易被提前“喚醒”，往往導(dǎo)致克隆“程序”無法正常啟動。

三是體細胞克隆胚胎的發(fā)育效率低。孫強給的數(shù)據(jù)顯示，猴子的囊胚發(fā)育率(受精卵發(fā)育一段時間才能叫囊胚)遠低牛、老鼠、豬等，優(yōu)質(zhì)囊胚率更低。受精卵著床后，很容易早產(chǎn)或流產(chǎn)。2004年，新加坡國立大學(xué)做的實驗，7個胚胎，60天內(nèi)全部流產(chǎn)。

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研究可促老年癡呆癥治療

中科院院士、神經(jīng)科學(xué)研究所所長、腦科學(xué)與智能技術(shù)卓越創(chuàng)新中心主任蒲慕明說，體細胞克隆猴構(gòu)建成功的意義首先是證明了獼猴可以用體細胞來克隆。

“獼猴可以成為真正有用的動物模型。體細胞克隆猴的重要性在于能在一年內(nèi)產(chǎn)生大批遺傳背景相同的模型猴。復(fù)雜和精準的基因編輯可以在體外培養(yǎng)的細胞進行，然后用核移植方法產(chǎn)生基因型完全相同的大批胚胎?！逼涯矫髡f，“用母猴載體懷孕出生一批基因編輯和遺傳背景相同的猴群。這是制作腦科學(xué)研究和人類疾病動物模型的關(guān)鍵技術(shù)?！?/p>

此外，他還介紹，克隆猴可以減少個體間差異對實驗的干擾，大大減少實驗動物使用數(shù)量。

使用體細胞在體外有效地做基因編輯，準確地篩選基因型相同的體細胞，然后用核移植方法產(chǎn)生基因型完全相同的大批胚胎，

據(jù)神經(jīng)所專家介紹，目前絕大多數(shù)腦疾病之所以不能有效治療，主要的原因之一是研發(fā)藥物通用的小鼠模型和人類相差甚遠，研發(fā)出的藥物在人體檢測時大都無效或有副作用。體細胞克隆猴的成功，將推動我國率先發(fā)展出基于非人靈長類疾病動物模型的全新醫(yī)藥研發(fā)產(chǎn)業(yè)鏈，促進針對阿爾茨海默病、自閉癥等腦疾病，以及免疫缺陷、腫瘤、代謝性疾病的新藥研發(fā)進程。

- 對話

“研究嚴格遵守實驗動物倫理規(guī)章”

昨天，新京報記者專訪了項目負責人、中科院神經(jīng)所非人靈長類研究平臺主任孫強，了解了這次克隆實驗的一些細節(jié)，并探討了動物實驗的倫理問題。

新京報：靈長類動物是人類的近親，但是靈長類動物有很多，為何選擇獼猴做實驗？

孫強：因為獼猴屬的食蟹猴和恒河猴是最常用的非人靈長類實驗動物。

新京報：聽說你們用的并不是成年的猴子，而是胚胎上摘取的組織，胚胎發(fā)育幾個月了？

孫強：我們選擇的不是胚胎，而是流產(chǎn)的胎猴組織。這是有區(qū)別的。組織來源的流產(chǎn)胎猴約60日齡。

新京報：你們選擇哪里的體細胞？細胞分化是否完全？

孫強：我們選擇的是胎猴的成纖維細胞，是一種分化的體細胞。

新京報：胚胎細胞和體細胞有什么區(qū)別，為什么體細胞不能再發(fā)育成個體？

孫強：胚胎細胞具有發(fā)育的全能性，但是數(shù)量有限。體細胞都執(zhí)行特定功能，就是完全分化了，沒有發(fā)育的全能性。再變成全能細胞，需要體外培養(yǎng)增殖。二者的胚胎構(gòu)建方式不一樣，胚胎細胞是自然受精形成的，體細胞要成為胚胎，就要進行核移植。

新京報：體細胞克隆的一般過程是什么？

孫強：需要把卵母細胞去核，然后將體細胞注入去核卵母細胞中，并融合激活，體外培養(yǎng)成克隆胚胎，然后移植到代孕的受體母猴子宮中，發(fā)育完全后，成為克隆后代。

新京報：靈長類克隆有哪些難點？

孫強：我之前也介紹過了，去核難度大，克隆胚胎發(fā)育率低等。

新京報：靈長類克隆有何意義？

孫強：簡單來說，就是可為生物和醫(yī)學(xué)研究及新藥研發(fā)提供在進化上與人類更接近的動物模型，且解決了靈長類繁殖周期長和個體差異大的問題。

新京報：克隆靈長類動物，并為人類研究提供，是否存在倫理困境？

孫強：我們嚴格按照實驗動物倫理規(guī)章開展相關(guān)研究，同時該技術(shù)的建立，為將來以猴為主要模型的研究動物數(shù)量使用極大減少。

本版采寫/新京報記者 李玉坤 王俊